μ- NOTA 30
By Víctor Deroncelé
La capacidad de movimiento de las bacterias es una característica taxonómica y funcional de gran importancia en microbiología. Desde los inicios del estudio de la bacteriología, la motilidad se ha utilizado para diferenciar y clasificar microorganismos. La visualización de la motilidad se ha abordado tanto a nivel microscópico (por ejemplo, mediante la técnica del «hanging drop») como macroscópico mediante medios semisólidos. Aquí describimos los fundamentos, protocolos y recetas para la prueba de motilidad, así como métodos alternativos que combinan la detección de otros parámetros bioquímicos.
- Fundamentos y Propósito
Propósito:
El medio de prueba de motilidad se utiliza para determinar la capacidad de los microorganismos para desplazarse desde el sitio de inoculación. Aunque existen medios específicos solo para motilidad, en la práctica se utilizan también medios multitest (por ejemplo, MIL, MIO y SIM) que permiten evaluar simultáneamente otras características metabólicas, como la producción de indol o la actividad de descarboxilación de aminoácidos.
Teoría:
- Mecanismo: La motilidad bacteriana se debe, en la mayoría de los casos, a la presencia de flagelos. La movilidad se manifiesta como una dispersión difusa del crecimiento bacteriano más allá de la línea de inoculación en un medio semisólido.
- Visualización: La incorporación de triphenyltetrazolium chloride (TTC) en el medio facilita la detección. TTC, en estado oxidado, es incoloro, pero al ser reducido por las bacterias se convierte en formazán, un pigmento insoluble de color rojo, que facilita la observación de la expansión del crecimiento.
- Importancia: La prueba de motilidad es esencial para diferenciar organismos dentro de familias como las Enterobacteriaceae y para complementar otros test bioquímicos en la identificación de patógenos.
- Recetas de Medios para la Prueba de Motilidad
A continuación, se presentan varias formulaciones utilizadas en la práctica, que pueden adaptarse según las necesidades del laboratorio:
2.1 Medio de Prueba de Motilidad con TTC
| Ingrediente | Cantidad | Notas |
| Extracto de carne | 3.0 g | Fuente de nutrientes |
| Digerido pancreático de caseína | 10.0 g | Provee aminoácidos y péptidos |
| Cloruro de sodio | 5.0 g | Mantiene el balance osmótico |
| Agar | 4.0 g | Concentración baja (medio semisólido) |
| Agua destilada | Hasta 1 L | |
| Triphenyltetrazolium chloride (TTC, 1% solución) | 5 mL | Se añade tras disolver el agar |
Procedimiento de preparación:
- Disolver el polvo del medio en agua destilada y calentar hasta ebullición para fundir el agar.
- Añadir la solución de TTC y mezclar bien.
- Distribuir en tubos de ensayo (5 mL por tubo).
- Autoclave a 121 °C y 15 psi durante 15 minutos.
- Dejar enfriar en posición vertical hasta solidificación.
2.2 Medio Motilidad-Indole-Lisina (MIL)
| Ingrediente | Cantidad | Notas |
| Peptona | 10.0 g | Fuente de nitrógeno |
| Tryptone | 10.0 g | Fuente de péptidos y aminoácidos |
| Extracto de levadura | 3.0 g | Fuente adicional de nutrientes |
| L-lysina hidrocloruro | 10.0 g | Para evaluar descarboxilación |
| Dextrosa | 1.0 g | Fuente de carbono |
| Citrato amónico férrico | 0.5 g | Indicador de reacciones metabólicas |
| Bromocresol púrpura | 0.02 g | Indicador de pH |
| Agar | 2.0 g | Medio semisólido |
| Agua destilada | Hasta 1 L |
Procedimiento:
Seguir pasos similares al medio anterior, distribuyendo en tubos y autoclave a 121 °C durante 15 minutos.
2.3 Medio Motilidad-Indole-Ornitina (MIO)
| Ingrediente | Cantidad | Notas |
| Yeast extract | 3.0 g | Fuente de nutrientes |
| Peptona | 10.0 g | Fuente de nitrógeno |
| Tryptone | 10.0 g | Fuente de péptidos |
| L-ornitina HCl | 5.0 g | Para evaluar descarboxilación |
| Dextrosa | 1.0 g | Fuente de carbono |
| Bromcresol púrpura | 0.02 g | Indicador de pH |
| Agar | 2.0 g | Medio semisólido |
| Agua destilada | Hasta 1 L |
Procedimiento:
Preparar de forma similar al MIL. Este medio permite evaluar la motilidad junto con la descarboxilación de ornitina y la producción de indol (añadiendo posteriormente el reactivo de Kovács).
2.4 Medio Sulfide-Indole-Motilidad (SIM)
| Ingrediente | Cantidad | Notas |
| Peptona | 30.0 g | Fuente principal de nitrógeno |
| Extracto de carne | 3.0 g | Fuente de nutrientes |
| Sulfato de amonio férrico | 0.2 g | Para la detección de H₂S (formación de precipitado negro) |
| Tiosulfato de sodio | 0.025 g | Sustrato para la producción de H₂S |
| Agar | 3.0 g | Medio semisólido |
| Agua destilada | Hasta 1 L |
Procedimiento:
Preparar y distribuir en tubos de 5 mL, autoclave y dejar enfriar. Este medio también se utiliza para detectar la producción de indol, tras la adición de reactivo de Kovács.
- Protocolo de Inoculación y Evaluación
- Inoculación:
- Utilizar una aguja estéril (preferiblemente recta o desechable) para tomar una colonia aislada de un cultivo fresco.
- Introducir la aguja verticalmente en el medio hasta aproximadamente 1 cm del fondo del tubo.
- Retirar la aguja siguiendo la misma trayectoria, para mantener la línea de inoculación.
- Incubación:
- Incubar los tubos a 35 °C (algunos medios, como el SIM, pueden incubarse a 37 °C) durante 18 horas o hasta que se observe crecimiento.
- Interpretación de Resultados:
- Positivo para motilidad: Se observa una nube difusa de crecimiento (generalmente de color rojo debido a la reducción del TTC) que se extiende más allá de la línea de inoculación.
- Negativo para motilidad: El crecimiento se restringe únicamente a la línea de inoculación, sin dispersión lateral.
- Comentarios y Recomendaciones:
- Técnica de Inoculación: Es crucial utilizar una aguja recta y evitar movimientos laterales al retirar la aguja para no confundir la interpretación del resultado.
- Condensación: La presencia de condensación en los tubos puede inducir resultados falsos positivos. Se recomienda preincubar los tubos a 37 °C durante 30–60 minutos con la tapa ligeramente suelta para minimizar el exceso de condensación.
- Confirmación de Resultados: Debido a que algunos microorganismos motiles conocidos pueden dar resultados negativos en ciertos casos, se sugiere confirmar los hallazgos mediante observación directa en montaje húmedo (hanging drop) o utilizando medios blandos en placas (0.1% a 0.4% de agar) para obtener información cuantitativa.
- Medios Multitest: Los medios MIL, MIO y SIM permiten evaluar, además de la motilidad, otras características metabólicas como la producción de indol y la actividad de descarboxilación de aminoácidos. La adición de reactivos como el de Kovács al final de la incubación permite detectar la presencia de indol mediante el cambio de color a rojo brillante
Referencias
- Microbe Notes: https://microbenotes.com/
- mnotas MITLAB: https://formate.mit-lab.com/micro-notas/
- Shields, P., & Cathcart, L. (2011). Motility test medium protocol. American society for microbiology, 214, 215.