μ- NOTA 33
By Víctor Deroncelé
Se presenta el caso de un adulto que acude a consulta tras desarrollar diarrea severa, fiebre y malestar general después de haber consumido alimentos potencialmente contaminados durante una reunión familiar. Durante la comida se sirvió pollo asado acompañado de ensalada, que se sospecha pudo haber estado mal manipulado o contaminado. El paciente comenzó a presentar síntomas aproximadamente 18 horas después del consumo, manifestando dolor abdominal intenso, múltiples deposiciones líquidas y episodios en los que las heces tenían una apariencia oscura, indicativa de la producción de sulfuro. Además, se reportó que otros dos comensales presentaron síntomas similares, lo que refuerza la posibilidad de un brote alimentario. La identificación precisa del patógeno responsable es esencial para implementar el tratamiento adecuado, prevenir complicaciones y evitar la propagación del brote.
- Metodología Microbiológica
Muestras Obtenidas
- Tipo de muestra:
- Muestra fecal.
- Análisis de sangre.
- Método de recolección:
- Las muestras fecales se recolectaron en recipientes estériles siguiendo protocolos estrictos para evitar contaminación cruzada.
- La sangre se extrajo mediante venopunción, cumpliendo con los protocolos clínicos establecidos para obtener muestras aptas para análisis complementarios.
Justificación de las Pruebas Microbiológicas
Ante la sospecha de una infección alimentaria por Salmonella enterica, se optó por un conjunto de pruebas que permiten la diferenciación y confirmación del patógeno:
- Agar XLD (Xilosa Lisina Desoxicolato):
Se seleccionó por su capacidad para diferenciar Salmonella de otros patógenos entéricos, ya que las colonias productoras de H₂S adquieren un centro negro.
- Agar MacConkey:
Permite evaluar la capacidad fermentativa del microorganismo, identificándose patrones de fermentación parcial.
- Pruebas Bioquímicas:
La evaluación de la fermentación de lactosa, la producción de H₂S y la prueba de motilidad son fundamentales para caracterizar fenotípicamente al aislado.
- PCR para el gen invA:
Esta técnica molecular detecta el gen invA, presente de forma específica en Salmonella spp., confirmando la identidad del patógeno.
- MALDI-TOF:
La espectrometría de masas se emplea para la identificación rápida y precisa del microorganismo, complementando y validando los resultados obtenidos con métodos tradicionales.
Cultivo y Aislamiento
- Medios de cultivo utilizados:
- Agar XLD.
- Agar MacConkey.
- Condiciones de incubación:
- Incubación a 37 °C durante 24-48 horas en condiciones aerobias.
Pruebas Bioquímicas
- Fermentación de lactosa:
Se evaluó la capacidad fermentadora, siendo negativa en Salmonella enterica.
- Producción de H₂S:
Se detectó la producción de sulfuro de hidrógeno, evidenciada por la formación de un centro negro en el Agar XLD.
- Motilidad:
Se realizó una prueba para evaluar la capacidad de desplazamiento del microorganismo, característica de Salmonella spp.
Métodos Moleculares
- PCR:
Se utilizó para detectar el gen invA. Esta técnica amplifica secuencias específicas del ADN del patógeno, confirmando su presencia en la muestra.
MALDI-TOF
Aplicación:
Se empleó para identificar el microorganismo basándose en su perfil proteico único, permitiendo una confirmación rápida y precisa a nivel de especie.
Antibiograma.
Se realizó un antibiograma mediante la técnica de difusión en agar Mueller-Hinton, interpretado según los estándares del CLSI (2022). Los resultados del antibiograma fueron los siguientes:
| Antibiótico | Resultado |
| Ciprofloxacino | Sensible |
| Ceftriaxona | Sensible |
| Trimethoprim-Sulfametoxazol | Sensible |
| Amoxicilina-Clavulánico | Resistente |
| Tetraciclina | Resistente |
Estos resultados permitieron orientar las decisiones terapéuticas, optándose por el uso de ceftriaxona intravenosa para el tratamiento de la infección.
- Resultados
| Prueba | Resultado |
| Crecimiento en Agar XLD | Colonias con centro negro debido a la producción de H₂S |
| Crecimiento en Agar MacConkey | Colonias de color claro, indicativas de fermentación parcial |
| Prueba de Fermentación de Lactosa | Negativa |
| Prueba de H₂S | Positiva |
| Prueba de Motilidad | Positiva, característica de Salmonella spp. |
| PCR (gen invA) | Positiva, confirmando la presencia de Salmonella spp. |
| Identificación mediante MALDI-TOF | Confirmación de la identidad de Salmonella enterica |
| Antibiograma | Resultados según tabla anterior |
- Análisis de Resultados y Síntesis de Ideas Clave
- La producción de H₂S en el Agar XLD, manifestada por el centro negro de las colonias, es un hallazgo característico de Salmonella enterica.
- La negatividad en la fermentación de lactosa y la fermentación parcial observada en el Agar MacConkey respaldan la identificación del patógeno y lo diferencian de otros entéricos.
- La detección del gen invA mediante PCR confirma la presencia de Salmonella spp., reforzando el diagnóstico.
- La identificación mediante MALDI-TOF proporciona una confirmación rápida y precisa, lo que es crucial para la toma oportuna de decisiones terapéuticas.
- La información epidemiológica adicional –como el consumo de pollo asado y ensalada, el lapso de 18 horas entre la exposición y la aparición de síntomas, y la afectación de otros comensales– refuerza la sospecha de un brote alimentario.
- El antibiograma revela un perfil de resistencia que guía la elección de la terapia, siendo el patógeno sensible a ceftriaxona, ciprofloxacino y trimethoprim-sulfametoxazol, mientras muestra resistencia a amoxicilina-clavulánico y tetraciclina.
- Identificación del Organismo
La combinación de hallazgos –colonias productoras de H₂S en Agar XLD, resultados bioquímicos (fermentación negativa de lactosa y prueba de motilidad positiva), la detección del gen invA mediante PCR, la confirmación mediante MALDI-TOF y el antibiograma– permitió concluir de manera definitiva que el microorganismo responsable de la infección es Salmonella enterica.
- Referencias
- Clinical and Laboratory Standards Institute. (2022). CLSI Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing M100 (32ª ed.).
- Foley, S. L., & Lynne, A. M. (2008). Food animal-associated Salmonella challenges: pathogenicity and antimicrobial resistance. Journal of Animal Science, 86(Suppl 14), E173-E187.
- Rahn, K., et al. (1992). Amplification of an invA gene sequence of Salmonella typhimurium by polymerase chain reaction as a specific method of detection of Salmonella. Molecular and Cellular Probes, 6(4), 271-279.
- Hanning, I., et al. (2007). Evaluation of a novel multiplex PCR assay for the identification of Salmonella spp. in food samples. Journal of Microbiological Methods, 69(3), 413-420.